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      如何建設PCR實驗室

      日期:2021-10-13 點擊: 6 次


      PCR實驗室,不但在實驗室設置及儀器設備等硬件上要滿足開展臨床檢驗的條件,而且要求實驗室在日常工作要有文件化的工作程序。博泰小編帶大家了解如何建設PCR實驗室。

       

      一、PCR實驗室質量管理體系

       

      1、根據實驗室的具體情況編寫質量體系文件,《質量手冊》、《程序文件》、《作業指導書》,并保證管理體系運行有效。

      管理體系的特點是應有明確的目的、規范的管理、有效的制約、高效的機制、能自我發展的整體。

       

      2、建立完善的SOP文件,對完成各項質量活動的方法作出規定,每個SOP都應對一個或一組相互關系的活動進行描述。每個SOP文件應說明該項質量各環節的輸入、轉換和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以及它們與有關活動的接口關系。

       

      3、明確每個環節轉換過程中各項因素的要求,即由誰做、做什么、做到什么程序、達到什么要求,如何控制、形成什么記錄和報告,以及相應的審批手續。規定在質量活動中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施。SOP應簡練、明確和易懂并且工作人員熟練掌握和嚴格遵守。

       

      二、PCR實驗室的相關設置

       

      要完成一組PCR實驗,通常需要經過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產物分析4個實驗過程。這4個實驗過程的實驗用房應相鄰布置,組成一個獨立的PCR實驗區。標準的PCR實驗區包括:試劑準備區、標本制備區、擴增區、產物分析區、各區配套的緩沖區及公共走廊。

       

      三、PCR實驗室整體平面布局

       

      1、試劑準備區

      該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。試劑準備區配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,計算冷負荷時,需要將它們計算在內。房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區的壓力梯度要求為:相對正壓狀態,以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染。

       

      2、標本制備區

      該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。標本制備區配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,計算冷負荷時,需要將它們計算在內。在標本制備區,還需要配備生物安全柜,用于進行提取核酸的操作。為避免提取的核酸在柜內反復循環,造成標本之間的交叉污染,出現假陽性結果,該區域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區垂直氣流全部來自實驗室,排風經過高效過濾器過濾后直接排至室外,不允許回到安全柜和實驗室中。

       

      四、正負壓區域緩沖室的設置

       

      根據壓力梯度的要求,試劑配制室和樣品處理室為相對正壓,擴增室和產物分析室為相對負壓,要求正壓的區域和要求負壓的區域的緩沖室內的壓力設計大不相同。正壓緩沖室符合一般正壓潔凈室的緩沖原則,主要是防止室外環境空氣中的氣溶膠進入室內。負壓緩沖室則是要求緩沖室對核酸擴增室及產物分析區保持正壓,對緩沖室外也保持正壓。

       

      五、污染的預防與控制

       

      1、PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。

       

      2、工作區域的嚴格劃分,各個實驗區域要有明顯的標記,以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。合理的系統設置,合理的空調通風系統設置,盡量采用全送全排的空調系統;嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。

       

      3、規范的操作,臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區進行清潔。

       

      4、嚴格的管理:嚴格控制進出實驗室的人員。在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域;盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。擴增產物分析區是最主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等。


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